技术简介：本发明涉及一种人血清白蛋白在毕赤氏酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｓ）中的表达与纯化方法。本发明的方法特征在于重组表达质粒ｐＰＫＱ－ＨＳＡ的构建和表达ＨＳＡ的高效分离纯化。用该方法获得的样品纯度高于９９％。一种高表达人血清白蛋白的巴斯德毕赤酵母重组细胞的构建表达和纯化方法，其特征在于该方法包括下列步骤： 一、人血清白蛋白ｃＤＮＡ的获得： （１）人胚肝细胞总ＲＮＡ的抽提 按照Ｔｒｉｚｏｌ ＲＮＡ抽提试剂盒推荐方法，从中国人胚肝细胞中抽提总ＲＮＡ； （２）ｐｒｅ－ＨＳＡ ｃＤＮＡ合成和ＰＣＲ体外扩增 根据已知天然ＨＳＡ基因５’和３’端序列，设计引物： 引物１：５’ＣＧＧＡＡＴＴＣＴＴＡＴＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＣＡＧＣ３’ 引物２：５’ＣＧＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＡＡＣＣＴＴＴＡＴＴＴＣＣ３’ 以抽取的人肝白细胞总ＲＮＡ为模板，反转录合成人血清白蛋白ｐｒｅ－ＨＳＡ ｃＤＮＡ， （３）所构建的基因５’端ＢａｍＨ１位点与ＡＴＧ之间插入了一段Ｋｏｚａｋ序列５’ＣＣＡＣＣ３’，３’端紧接基因的终止密码含一ＥｃｏＲｌａ位点。 二、ＨＳＡ在巴斯德毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）中的表达 （１）重组表达质粒ｐＰＫＱ－ＨＳＡ的构建： 将ＰＵＣ１９－ＨＳＡ克隆载体中ｐｒｅ－ＨＳＡ基因片段用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲ