技术简介：一种重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺，其特点是先进行工程菌发酵，发酵后收集菌体，然后将菌体裂解，分离包含体，采用巯基乙醇尿素变性剂进行抽提，经加热处理后用硫酸铜复性，并经ＤＥ－５２离子交换层析纯化。本发明具有工艺流程简便、ＳＯＤ产量高、单位成本低等特点，产品适用于医疗领域。一种重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺，其特征是：（１）挑取工程菌的单菌落接种在装有含ＬＢ培养基的摇瓶中，３０℃振荡培养１０小时，转入装有含铜锌盐的培养基的发酵瓶中，３０℃培养约１０小时，再经ＩＰＴＧ诱导培养后收集菌体；（２）取菌体，用ＰＨ８．０，５０ｍＭＴｒｉｓＨＣＬ－１ｍＭＥＤＴＡ－１００ｍＭＮａＣｌ（ＴＥＳ缓冲液）洗两遍，沉淀悬于相同缓冲液中，加溶菌酶，４℃作用３０分钟，加脱氧胆酸钠（ＤＯＣ），待菌体破碎后加ＤＮＡ酶降解，到破菌混合液不再粘稠时，离心弃上清，沉淀用缓冲液洗两遍，将沉淀溶于ＰＨ８．０，浓度５０ｍｍｏｌＴｒｉｓＨＣＬ－１０ｍｍｏｌ巯基乙醇－８Ｍ尿素，加ＰＭＳＦ到２ｍＭ，６５℃加热１０分钟；（３）取以上尿素抽提液用硫酸铜复性液透析复性；（４）ＤＥ－５２柱层析：复性混合物离心除去沉淀物，取上清用１００ｍＭ磷酸钠缓冲液ＰＨ７．８透析平衡，然后加上经同样平衡液平衡好的ＤＥ－５２柱，用平衡液洗下杂蛋白后，用氯化钠梯度洗脱，收集ＳＯＤ活性峰，超滤浓缩，脱盐，冷冻干燥。