技术简介:本发明涉及多肽药物的生产工艺。本发明提供了重组日本血吸虫谷胱甘肽—转移酶的生产工艺,该工艺以家蚕核型多角体病毒为载体、以家蚕(或蛹)为生物反应器表达系统,具有表达效率高、产物活性好、生产成本低等特点,家蚕资源丰富,用以表达血吸虫抗原基因是具有广阔前景和效益的新技术途径,宜于规模型工业化生产。一种利用家蚕系统生产重组日本血吸虫谷胱甘肽一转移酶的生产工艺,其特征在于该生产工艺包括下列步骤:(1)含SjC28kKDaGST基因的重组家蚕核型多角体病毒Bm-Sj28的构建;SjC28kKDaG8T基因编码区为636bp,编码211个氨基酸,基因5’,端Ban BI识别序列ATG相隔2bp,由于pBacPAK8多克隆位点下游的旁侧序列中存在仅有的BindIII位点,而SjC28基因的2lbp处亦有一个BindIII位点,所以当SjC28基因以Ban HI、KpnI定向装入 pBacPAK8后,重组质粒经HindIII酶切电泳,显示出5Kb和1. 1Kb两种片段,非重组质粒则只出现5. 1Kb一种片段,扩增纯化后的重组转移质粒KNA和酶切线性化的BmNPV DNA在Lipofectin作用下共转染单层培养的家蚕DmN细胞,进行细胞内DNA同源重组,27℃培养1周后,收集上槽液,分别作10-3、5×10-4和10-4稀释,感染1×105细胞1小时,铺上含0.2mg/1X-gal的低熔点琼脂槽27℃4天后,出现蓝、白空斑,桃取多个白斑于24孔墙养板(1×104细胞/孔),