丝氨酰组氨酸、磷酰化丝氨酸、磷酰化苏氨酸用作核酸切割剂

技术简介:本发明涉及将丝氨酰组氨酸、磷酰化丝氨酸、磷酰化苏氨酸用作DNA及RNA的切割剂。切割的条件是将切割剂溶于无菌高纯水,配成溶液,然后与切割底物混合,用缓冲液调整其pH值,并使缓冲剂和底物的终浓度保持在一定范围,置于一定温度下保温,即实现对底物的切割。本发明的切割剂可以在较宽的温度和pH值范围内对核酸进行切割,与核酸特异序列识别系统偶联后,可用作分子生物学研究的人工工具酶以及基因治疗药物。一种将丝氨酰组氨酸作为核酸切割剂的用途,其特征在于被切割的核酸为DNA或RNA,其切割过程为:将丝氨酰组氨酸溶于无菌高纯水,配成溶液,将此溶液与被切割的核酸即切割底物混合,切割底物为双链线状DNA、超螺旋质粒DNA和RNA,以20mM(毫摩尔/升)的伯瑞坦-罗比森(Britton-Robison)(由磷硫、乙酸、硼酸组成,其浓度分别为0.04M)缓冲液作为缓冲体系,用氢氧化钠调pH值在4.0-9.0的范围,丝氨酰组氨酸的终浓度为1-200毫摩尔/升(mM),底物的终浓度为0.05-50mM(按单个碱基的浓度计算),将丝氨酰组氨酸与底物的混合物置于10-80℃下保温,保温0-96h取出,即完成对底物的切割。

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