技术简介：本发明属于人类细胞周期素A基因的制备方法，涉及一种人类细胞周期素A基因的提取与纯化的方法。从大肠杆菌中提取含有基因片段的质粒，经过限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳分离基因片段与载体，从凝胶中回收细胞周期素A基因片段并纯化。这种方法不会对基因产生损伤，而且具有较高的回收率。本发明的方法可以用于提取和纯化人类细胞周期素A基因。1、一种人类细胞周期素A基因的提取与纯化方法，其步骤包括(1) 从大肠杆菌中用碱裂解法提取质粒pGEM-人类细胞周期素A基因，其特征在于还包括如下步骤： (2)提取的质粒pGEM-人类细胞周期素A基因用限制性内切酶EcoR I消化称之为酶切法，具体的酶切方法是采用如下的物质与配比： 限制性酶切酶EcoRI4～8μl 10×缓冲液5～10μl 带有人细胞周期素A基因的质粒45～50μl 灭菌水80～90μl 保持总体积：150μl 反应条件：温度为35～40℃，时间为8～24小时 质粒pGEM-人类细胞周期素A基因浓度为10～15μg (3)待质粒pGEM-人类细胞周期素A基因消化完全后，用0.7％的琼脂糖凝胶电泳分离基因片段和载体，在100V电压下保持2.5小时；人类细胞周期素A基因片段与载体经琼脂糖凝胶电泳分离后，在紫外灯下将人类细胞周期素A基因条带尽可能窄的切下来，切成小块后装入离心管中，加入20℃ 的纯水中正好将其淹没，放置12小时，并振摇数次；然后用最大转速 1200r/min离心机离心10分钟，使琼脂糖胶块沉在离心管底部，吸出的上层水溶液即为回收的人类细胞周期素A基因溶液；经