高抗病毒活性重组鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)的制取方法及用途

技术简介:高抗病毒活性重组鸡γ-干扰素的制取方法及用途,涉及一种广谱高效抗病毒基因工程产品的制取方法。将ChIFN-γ基因从真核质粒中经双酶切后克隆到转移载体中,获得重组转移质粒pFASTBAC1-ChIFN-γ;取DH10Bac感受态细胞,加入1ng pFASTBAC1-ChIFN-γ,转座后,用SOC培养基稀释培养物,涂布Luria平板,培养后,挑取白色菌落,Luria平板进行纯化,阳性质粒命名为Bacmid-ChIFN-γ,提取阳性质粒DNA;取上述重组DNA质粒转染Sf9细胞,制得高抗病毒活性重组鸡γ-干扰素。本发明还在于将该干扰素用于抑制MDV GA对CEF的致病变作用、抑制NDV F48E8在细胞上的增殖、抗AIV(H5N1)病毒对细胞的致病作用。1、一种高抗病毒活性重组鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)的制取方法,其特征在于由以下步骤制得:a、将ChIFN-γ基因从真核质粒pcDNA-ChIFN-γ中用EcoRI和NotI双酶切后克隆到转移载体pFASTBAC1中,获得重组转移质粒pFASTBAC1-ChIFN-γ;b、取DH10Bac感受态细胞,加入lngpFASTBAC1-ChIFN-γ,转座后,用SOC培养基10倍梯度稀释培养物,各取100μl涂布Luria平板,37℃培养24~48小时,挑取白色菌落,Luria平板进行四次筛选纯化,阳性质粒命名为Bacmid-ChIFN-γ,提取阳性质粒DNA用于下一步转染;c、取上述重组DNA质粒(Bacmid-ChIFN-γ)转染Sf9细胞。

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