技术简介：本发明涉及一种细胞角蛋白19(CK19)mRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒，该试剂盒包含总RNA提取液(细胞裂解液I、细胞裂解液II、RNA洗涤缓冲液I、RNA洗涤缓冲液II和无RNA酶的水)，反转录反应液，dNTP混合物，逆转录酶，PCR反应液，探针，阳性标准品，对照品。本发明通过对新鲜抗凝外周血提取总RNA，并通过逆转录mRNA样品得到cDNA，再结合实时荧光定量PCR检测技术，可准确定量检测标本中CK19的mRNA的表达量。本发明所提供的试剂盒可用于临床及科研中检测肿瘤患者的外周血、骨髓、淋巴结及癌组织中CK19 mRNA的表达，为各种乳腺癌、小细胞肺癌的早期诊断、转移、复发、治疗方案的确定及预后的判断提供重要的参考依据。1.细胞角蛋白19(CK19)mRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征为：它包含细胞裂解液I、细胞裂解液II、RNA洗涤缓冲液I、RNA洗涤缓冲液II、无RNA酶的水、RNA分离柱、反转录缓冲液、dNTP 混合物、逆转录酶储存液、PCR反应液、探针、标准品、对照品；以上各种溶液所用溶剂均为水； (1)、细胞裂解液I包含0.1mol/LTris-HCl(三羟甲基氨基甲烷-盐酸，pH7.6，25℃)、0.1mol/L氯化钠、0.05mol/L氯化镁、水； (2)、细胞裂解液II包含3mol/L异硫氰酸胍、2mol/L盐酸胍、0.3mol/L醋酸钠(pH5.2)、0.2％(W/V) SDS(十二烷基硫酸钠)、水； (3)、RNA洗涤缓冲液I包含0.2mol/L醋酸钠(pH5.2)、0.1mol/L氯酸钠、0.1mol/LTris-HCl(pH7.5， 25℃)、水； (4)、RNA洗涤缓冲液II包含1.2mol/L柠檬酸钠、0.5mol/LTris-HCl(pH7.5，25℃)、水； (5)、无RNA酶的水通过下列方法制得：向去离子水加入DEPC(焦碳酸二乙酯)，至终浓度为0.05％