技术简介：本发明公开了一种猪肝金属硫蛋白的提取方法，涉及金属硫蛋白的提取方法，具体地说，涉及猪肝金属硫蛋白的提取方法。本发明用乳猪作为供体，经微量元素锌腹腔注射诱导，5次诱导后宰杀，从猪的肝脏中分离提取一种具有稳定性好、纯度高的金属硫蛋白，产量是从兔体提取金属硫蛋白的2-3倍。经锌诱导的猪肝金属硫蛋白具有成本低、效果好、产量高、诱导剂来源广、无副作用等优点。且猪是一种饲养非常普遍的动物，来源广，经诱导提取金属硫蛋白后，猪肉可照常供食用。本发明的产品适用于畜禽饲料抗氧化及畜禽抗应激效应中。1、一种猪肝金属硫蛋白的提取方法，其特征在于有下列步骤： ①诱导选用健康的乳猪，用ZnSO4溶液采用腹腔注射法进行3-7次的剂量递增的诱导，每次剂量为10-150mg/kg体重； ②检测诱导完1-3天后屠宰，并将所取新鲜肝脏样品直接按巯基显色法对金属硫蛋白的含量进行检测，合格指标为每1g猪肝中可提取的金属硫蛋白≥ 5mg； ③粗提将检测合格的新鲜肝脏捣碎置于第一容器中，加入Tris-HCl溶液搅拌匀浆，冷冻离心，取上清液置于第二容器中，再加C2H5OH-CHCl搅拌、冷冻、离心，又取上清液置于第三容器中，放入70℃-90℃的水浴锅中水浴3-8min，取出后迅速冷却至室温，再冷冻离心，取上清液置于半透膜中，用磷酸缓冲液透析，半透膜中剩余的溶液即为金属硫蛋白的粗提液； ④纯化将粗提液超滤浓缩，得浓缩液，在浓缩液中加入乙醇放置过夜，然后再冷冻离心，去上清液取沉淀物，再用Tris-HCl溶解，进行SephadexG-50 柱层析，在柱面加入MT显色试剂对MT组分着色；用NH4HCO3进行洗脱，收集着色的MT段洗脱液；将收集的着色部分再进行层析，用NH4HCO3进行梯度洗脱，自动收集器收集峰尖部