技术简介：一种凝血酶分离纯化方法，首先取动物血液为原材料，将此血液加入柠檬酸钠溶液作为抗凝剂；离心分离获得血浆；经冷冻、解冻，再次离心获得上清液；在上清液中加入BaCl2离心收集沉淀物；在此沉淀物中加入EDTA溶液解吸附，再次离心弃去沉淀，获得凝血酶原粗液；室温下向凝血酶原粗液中加入CaCl2溶液使凝血酶原粗液浓度达到0.1mol/l，再经DEAE——纤维素阴离子交换柱层析获得凝血酶纯品，冷冻干燥得到凝血酶成品。本发明通过将血浆冷冻，低温解冻先有效地去除了部分纤维蛋白原，提高了凝血酶的得率，通过优化离子交换层析获得高纯度的凝血酶，其比活力为1500U/mg蛋白，得率为0.4‰。一种凝血酶分离纯化方法，其特征在于： 1)首先取动物血液为原材料，在此血液中按9∶1的体积比加入质量百分比浓度为3.8％的柠檬酸钠溶液作为抗凝剂； 2)在4℃以2500～3000转/分钟的离心力下离心5～10分钟分离获得血浆； 3)将此血浆在-20～-30℃冷冻1～3天后，2～4℃解冻，在4℃以2500～ 3000转/分钟的离心力下离心5～10分钟分离获得上清液； 4)在每升上清液中加入80～120ml的浓度为1mol/l的BaCl2溶液，在 4℃以3500～4000转/分钟的离心力离心5～10分钟收集沉淀物； 5)在此沉淀物中加入pH值为7.4的0.2mol/l的EDTA溶液解吸附，在 4℃下以3500～4000转/分钟的离心力离心5～10分钟弃去沉淀，获得凝血酶原粗液； 6)室温下向凝血酶原粗液中加入CaCl2溶液使凝血酶原粗液浓度达到 0.1mol/l，再经DEAE——纤维素阴离子交换柱层析获得凝血酶纯品，冷冻干燥得到凝血酶成品。