用于生产外源蛋白的猪血清白蛋白基因座打靶载体构建方法

技术简介:为了利用猪生产外源蛋白特别是人血清白蛋白,我们构建了能定位整合在猪血清白蛋白基因座上的三种类型打靶载体,这样可以使用猪血清生产人血清白蛋白。首先我们克隆了猪血清白蛋白基因组翻译起始位点前14kb、所有外显子和内含子、3’端未翻译4kb,共计35kb,并进行了序列分析。在此基础上,构建了两种能将人血清白蛋白cDNA定位整合在猪血清白蛋白基因座上的打靶载体,一种能将人血清白蛋白基因组DNA在猪血清白蛋白基因座上的打靶载体,将这些打靶载体转染猪胎儿成纤维细胞或其它细胞,筛选出中靶的细胞,用于核移植动物克隆,获得能在血清中生产人血清白蛋白的转基因猪。1.三种具有能进行猪血清白蛋白基因打靶的载体及其构建方法,能将人血清白蛋白定位整合在猪白蛋白基因座上,使制备的转基因猪能在血清中产生人血清白蛋白,而不产生猪本身的血清白蛋白,从而为生产人血清白蛋白提供原料。

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