技术简介:本发明公开了一种利用生物发酵工艺生产肝素钠的方法。该方法采用2709蛋白酶作为催化剂,D204强碱性阴离子交换树脂作为离子交换树脂,并采用150-180目多层布筛进行过滤,有效克服了原生产工艺生产周期长、水解不完全、收率低、所得产品纯度低、产生的废水严重污染环境等缺陷,采用此工艺生产1亿国际单位肝素钠只需猪小肠粘膜1800-2000根,产品纯度达80效价/毫克以上。1、一种生物催化法生产肝素钠的方法,其特征在于所采用的催化剂为2709蛋白酶,且生产过程依次包括以下几个步骤:(1)按照1∶2.3-4重量比向猪小肠粘膜中加入水,加入氢氧化钠调节pH值至9-10,升温至50-55℃,并按每公斤小肠1.5克的比例加入2709蛋白酶,保温搅拌45分钟后,按猪小肠粘膜重量每公斤加入0.12-0.15千克粗盐,升温至60-70℃;(2)催化反应产物用150-180目棉布筛过滤,分离除去杂质蛋白质,得到过滤液;(3)在每公斤猪小肠粘膜获得的滤液中加入0.1-0.13公斤D204强碱性阴离子交换树脂,反应2-3小时,分离母液得到离子交换后的树脂;(4)以完全浸没离子交换后的树脂为量,分别用浓度为每升0.04-0.06摩尔的氯化钠、每升0.4-0.6摩尔的氯化钠溶液洗涤搅拌15-20分钟,分离母液,得到洗涤后的树脂;(5)分两次以完全浸没洗涤后的树脂为量,加入每升3-4摩尔的氯化钠反应20-30分钟,分离树脂,收集合并两次反应液体产物;(6)用每升2摩尔的氢氧化钠溶液调节上述反应液体产物的pH值至11-12,升温至60-80℃,用150-180目多层棉布筛过滤,滤液