高酶活家蚕基因工程植酸酶的提取方法

技术简介:本发明涉及一种高酶活家蚕基因工程植酸酶的提取方法,应用重组BmNPV载体-家蚕宿主表达系统生产植酸酶,用植酸酶基因替换家蚕核型多角体病毒基因组中的多角体蛋白基因,将特定的重组家蚕核型多角体感染家蚕,在蚕体内繁殖产生目标物植酸酶蛋白;将目标病蚕经匀浆后与一定细度的麸皮吸附,再经烘干——粉碎——过筛后标定酶活的工艺得到商业化产品,在目标病蚕匀浆处理前将病蚕作冻存处理。采用本发明的方法可使蚕体细胞内的植酸酶充分释放,较常规方法的平均检测酶活值提高55.9%以上。1.高酶活家蚕基因工程植酸酶的提取方法,应用重组BmNPV载体-家蚕宿主表达系统生产植酸酶,用植酸酶基因替换家蚕核型多角体病毒基因组中的多角体蛋白基因,并使其处于多角体蛋白基因启动子的控制下,再将此重组质粒与野生型BmNPV-DNA共转染于家蚕细胞,通过体内同源重组得到带有外源植酸酶基因的重组病毒,再利用多角体蛋白基因的启动子启动植酸酶基因,并将此重组家蚕核型多角体感染家蚕,在蚕体内繁殖产生目标物植酸酶蛋白:将目标病蚕经匀浆后与一定细度的麸皮吸附,再经烘干——粉碎——过筛后标定酶活的工艺得到商业化产品,其特征在于,在目标病蚕匀浆处理前将病蚕作冻存处理。

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