技术简介：本发明涉及凝乳酶的制备技术领域。以犊牛皱胃为材料，经低温诱导，用NaCl和乙醇的水溶液提取凝乳酶。粗酶液经离子交换柱、分子筛凝胶纯化，得部分纯化酶。该酶反应最适温度为50℃，最适pH值为5.8，在pH3.0－6.0范围内酶活力稳定，Ca2+是酶的激活因子，牛乳总固形物含量9％以上时酶活力逐渐增加。本发明具有原料来源容易、价廉，省时经济、酶含量及活力回收高。工艺生产设备投资少，工艺简单易行，为我国凝乳酶的开发利用和新型乳制品市场开拓提供新的途径。1.犊牛凝乳酶的制备方法，其特征在于：将新鲜或冷冻的犊牛皱胃清洗后用奶粉和CaCl2抹于表面，经低温条件下诱导后剔除胶原和脂肪，切碎，加入预冷4℃的提取液，提取液为含5％的NaCl和10％无水乙醇的水溶液，提取液的容积与物料湿重比为3-5∶1，匀浆，搅拌浸提30-240min，离心，取上清液，重复1-3次，合并几次所得的上清液，于上清液中加入容积数为上清液5％的1mol/L的HCl沉淀杂蛋白，离心，取上清液，于上清液中加入重量数为上清液5％的NaCl溶解出酶蛋白，再用1mol/L NaOH调整pH值为微酸性后，即为液体粗酶，将液体粗酶用DEAE离子交换柱层析，0.05mol/L-0.4mol/L、pH5.4-6.4柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液进行pH线性梯度洗脱，洗脱至洗脱液在280nm波长下无吸收，洗脱液的流速为1.25ml/min，收集器收集洗脱液，每管装5ml，取收集的第12-16管酶液，经透析、聚乙二醇浓缩到原体积的1/3后，再用Sephadex层析柱层析，0.05mol/L-0.4mol/L、pH5.4-6.4柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液进行pH线性梯度洗脱至洗脱液在280nm波长下无吸