技术简介:本发明涉及一种高表达、高纯度、高活性基因重组人溶菌酶的生产方法及其新用途。提供了利用提取纯化的基因工程技术表达的人溶菌酶的溶菌活性,用于临床上细菌和真菌的感染,特别是耐药性细菌感染的治疗方法,以及革兰阴性菌感染治疗后内毒素引发的后遗症的治疗方法。提供了用于各种治疗用途的抗生素和人溶菌酶的药用组合物。1、一种高表达、高纯度、高活性基因重组人溶菌酶的生产及用途,其特征在于:所述的生产用的材料是:采用毕赤酵母的smd1165(his4.prb1), smd1163(his.pep4.prb1),Gs115、km71菌株;其基因工程人溶菌酶的质粒主要是以pPIC9k系列的质粒整合在上述菌株染色体上;生产步骤是:1、摇瓶种子制备:以配制200毫升培养基为基准,用H3PO4(磷酸)4-8毫升、MgSO4(硫酸镁)1-5克,K2SO4(硫酸钾)2-6克,KOH(氢氧化钾)1-3克,CaSO42H2O(硫酸钙)1-3.5克,加蒸馏水至200毫升,高压灭菌后接种甘油管种子,摇床转数为每分钟250转,培养温度为20-35℃,在恒温床上培养36-48小时。2、种子罐培养:以种子罐最大体积1升为基准,配制培养基用H3PO4(磷酸)25- 19毫升,MgSO4(硫酸镁)13-17克,CaSO42H2O(硫酸钙)0.4-0.8克,K2SO4 (硫酸钾)16-20克,KOH(氢氧化钾)2.12-6.12克,加蒸馏水至500毫升,高压灭菌后接种摇床种子;发酵反应器操作参数温度为20-32℃,PH值为