基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺

技术简介:本发明涉及一种生物工程,基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺,其特征是首先进行工程菌发酵扩增,热激诱导,收集菌体。经缓冲液抽提、再经离子交换、分子筛柱层析分离纯化。本发明具有工艺流程简单、SOD半衰期长、产量高、单位成本低等优点,本产品可广泛应用在化妆品、保健食品、医疗等领域。1、一种生物工程基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺,其特征是: (1)、挑取工程菌单菌落接种在含氨苄的LB培养基斜面培养,然后接种到含AMP100μg/ml的LB培养基的三角瓶中,30℃、180转/分,振荡培养10小时,OD值达到1.0时,收集菌液; (2)、取上述菌液,以1∶10的比例,接种到含有AMP100μg/ml的改良M9培养基的发酵罐中,30℃培养6小时,OD值达2.5-3.0时,迅速升温至42℃,热激诱导表达,然后再培养3-4小时,离心收集菌体; (3)、取菌体,用0.9%的NaCl洗两次,然后用PH7.8TES缓冲液悬浮菌体,冰浴条件下搅拌30分钟,加入稀释6倍的TES溶液,冰浴条件下搅拌40分钟,离心取上清液,离心的菌体加TES溶液冷冻,取出速暖至冰水混合物状,加入稀释6倍的TES溶液,搅拌40分钟,离心取上清液,将上述,上清液经超滤浓缩,得粗酶液; (4)、粗酶液经透析:DEAE-Sephadex-A50离子交换柱层析,其全部进入胶面后,再用PBS缓冲液进行梯度洗脱,收集目的蛋白峰溶液,再用Sephadex-200分子筛柱层析,收集含Cu·Zn-SOD酶的活力部

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